大鼠腸組織提取物實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織完全被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
M1(小鼠白血病細(xì)胞)
M14(人黑色素瘤細(xì)胞)
MA-891(小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞)
MDA-MB-435(人乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞)
MDA-MB-468(人乳腺癌細(xì)胞)
MKN-28(人胃癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞)
MKN45(人胃癌細(xì)胞)
MuM-2B(人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞)
MuM-2C(人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞)
MV3(人黑色素瘤細(xì)胞)
MX-1(人乳腺癌細(xì)胞)
NCI-H1975(人肺腺癌細(xì)胞)
NCI-H460(人肺癌細(xì)胞)
NCI-H661(人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞)
M-NFS-60 (小鼠白血病細(xì)胞G-CSF依賴性)
PA319(人大腸癌細(xì)胞)
PATU8988(人胰腺癌細(xì)胞)
PC-3M(人前列腺癌細(xì)胞)
SF-295(人XG惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞)
SMC-1(人胸膜瘤細(xì)胞)
SW1116(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞)
